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細(xì)胞凍存和細(xì)胞凍存步驟
2023-01-16
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而細(xì)胞凍存步驟及細(xì)胞凍存液的選擇也是影響細(xì)胞凍存效率及解凍復(fù)蘇后細(xì)胞活力的主要條件。下面就以細(xì)胞凍存液為例講解細(xì)胞凍存原理及細(xì)胞凍存的步驟。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使...
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慢病毒的感染效率受哪些因素影響？
2023-01-06
慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細(xì)胞的類(lèi)型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒感染的顯著特點(diǎn)是感染個(gè)體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前，大多經(jīng)歷長(zhǎng)達(dá)數(shù)年的潛伏期，之后緩慢發(fā)病，因此這些病原體被稱(chēng)為慢病毒。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)?？商峁┧械霓D(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所...
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種技術(shù)
2022-12-31
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專(zhuān)門(mén)技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類(lèi),一類(lèi)是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一類(lèi)是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)（依賴(lài)于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫...
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溶酶體是細(xì)胞內(nèi)的消化器官
2022-12-21
溶酶體（Lysosomes）是動(dòng)物細(xì)胞中重要的細(xì)胞器,其存在的完整性與動(dòng)物生理病理均密切相關(guān)。溶酶體是真核細(xì)胞中為單層膜所包圍的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)，內(nèi)部pH4～5，含豐富的水解酶，具有細(xì)胞內(nèi)的消化功能。新形成的初級(jí)溶酶體經(jīng)過(guò)與多種其他結(jié)構(gòu)反復(fù)融合，形成具有多種形態(tài)的有膜小泡，并對(duì)包裹在其中的分子進(jìn)行消化。因此，溶酶體具有溶解或消化的功能，為細(xì)胞內(nèi)的消化器官。溶酶體染色試劑盒可以標(biāo)記活細(xì)胞中的溶酶體，使之帶綠色熒光(Ex/Em=405/505nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物，...
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RNA的提取方法總結(jié)
2022-12-09
這篇文章主要講的是幾種常用的RNA提取方法。1、異硫氰酸胍氯化銫超速離心法原理：使用蛋白質(zhì)變性劑異硫氰酸胍有效抑制RNA酶的活性，經(jīng)過(guò)起始密度為1.78g/ml的氯化銫介質(zhì)，進(jìn)行密度梯度超速離心，RNA沉淀于管底，而DNA與蛋白質(zhì)在上清中。使用這種方法，不但能得到高質(zhì)量的RNA，而且能同時(shí)分離出細(xì)胞染色體DNA.本法對(duì)于冷凍時(shí)間長(zhǎng)、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核不易分離的組織標(biāo)本以及富含RNA酶的組織細(xì)胞(如胰腺)的RNA提取尤其適合。此法提取的RNA的質(zhì)量好和成功率高，已成為提取哺乳動(dòng)物細(xì)...
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轉(zhuǎn)染試劑用于提高基因?qū)嶒?yàn)的效率
2022-11-30
轉(zhuǎn)染是一種將外來(lái)顆粒和核酸轉(zhuǎn)移到細(xì)胞中的技術(shù)，它可以通過(guò)化學(xué)的方式來(lái)實(shí)現(xiàn)。轉(zhuǎn)染試劑用于提高基因?qū)嶒?yàn)的效率，從而可以在應(yīng)用基因和基因組令人難以置信的功能領(lǐng)域進(jìn)行大量研究。在所有轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)染方式的選擇尤為重要。陽(yáng)離子聚合物與帶負(fù)電荷的核酸序列結(jié)合，帶正電荷的復(fù)合物被細(xì)胞膜吸引并通過(guò)內(nèi)吞作用整合到宿主細(xì)胞中。此類(lèi)試劑包括PLGA（聚乳酸-乙醇酸共聚物），一種可安全用于轉(zhuǎn)染程序的食品級(jí)聚合物，以及PBAE（聚-β-氨基酯），一種能夠保護(hù)DNA分子的聚合物在宿主細(xì)胞內(nèi)遞送。這些從P...
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微生物的培養(yǎng)方法步驟介紹
2022-11-29
微生物培養(yǎng)所培養(yǎng)的微生物通常是病菌、細(xì)菌、放線菌、真菌等，屬于生物培養(yǎng)的一種。微生物培養(yǎng)步驟：1.配置不同濃度的營(yíng)養(yǎng)液稀釋液:取營(yíng)養(yǎng)液1ml溶于9ml無(wú)菌水中,振蕩5min配成10%的溶液.2.將容器口靠近(注意不是對(duì)著)酒精燈燈焰用吸管從此溶液中吸取1ml加入到裝有9ml無(wú)菌水的試管中.以此類(lèi)推制成1%,0.1%,0.01%等不同濃度的稀釋液.3.將試管口靠近(注意不是對(duì)著)酒精燈燈焰,左手拿試管,右手托培養(yǎng)皿(僅露一條小縫,且靠近燈焰).將溶液倒入培養(yǎng)皿中,在各培養(yǎng)皿上標(biāo)...
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蛋白酶K的性質(zhì)從這三個(gè)方面介紹
2022-11-27
蛋白酶K來(lái)源于林伯氏白色念球菌（TritirachiumalbumLimber），是一種與枯草桿菌蛋白酶相關(guān)的絲氨酸蛋白酶。由于它能降解角蛋白（keratin），因此被命名為蛋白酶K。它是一種高活性的廣譜蛋白酶，在變性劑尿素或十二烷基磺酸鈉（sodiumdodecylsulfonate，SDS）溶液中依然能保持較高酶活力，所以被廣泛應(yīng)用于各種生物材料中的DNA或RNA的提取。蛋白酶K的性質(zhì)從這三個(gè)方面介紹：一、分子結(jié)構(gòu)蛋白酶K由一條肽鏈組成，包含277個(gè)氨基酸殘基，相對(duì)分子質(zhì)...
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