EZ Trans細胞轉(zhuǎn)染試劑作為新一代的轉(zhuǎn)染試劑，其轉(zhuǎn)染原理是帶正電的陽離子聚合物與核酸中帶負電的磷酸基團形成帶正電的復(fù)合物后與細胞表面帶負電的蛋白多糖相互作用，并通過胞吞作用進入細胞。本產(chǎn)品經(jīng)過李記生物的優(yōu)化處理，具有轉(zhuǎn)染效率高，細胞毒性低，操作簡單，重復(fù)性好，適用范圍廣等特點。

以下為真核細胞轉(zhuǎn)染試劑說明書：

轉(zhuǎn)染試劑運輸與保存

藍冰運輸。4℃保存，有效期12個月。【注】：不可冷凍！

高效轉(zhuǎn)染試劑使用方法（以 24 孔板為例，其他培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染請參考表1）

1. 接種細胞

對于貼壁細胞，轉(zhuǎn)染前18-24 h進行鋪板（不含抗生素），使其在轉(zhuǎn)染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞，轉(zhuǎn)染當天，配制EZ Trans-DNA復(fù)合物之前進行鋪板，每500 µL生長培養(yǎng)基中加入4~8×10⁵cells。  

【注】：培養(yǎng)液中的血清不影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染試劑使用量受細胞類型及其他實驗條件影響，建議初次使用時設(shè)置梯度進行優(yōu)化最佳使用量。

2. 準備EZ Trans-DNA復(fù)合物

（1）對于每孔細胞，將1 μg質(zhì)粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），混勻。

（2）對于每孔細胞，將3 μL EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培養(yǎng)基），輕輕混勻。

【注】：無血清的高糖DMEM培養(yǎng)基是稀釋液，不能使用含血清的培養(yǎng)基進行DNA和EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成過程不能含有血清。

（3）將稀釋好的EZ Trans轉(zhuǎn)染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質(zhì)粒DNA中，輕輕混勻。

【注】：此混合的順序不能反向進行。

（4）室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復(fù)合物。

3. 轉(zhuǎn)染細胞

（1）將上述80 μL EZ Trans-DNA轉(zhuǎn)染復(fù)合物均勻滴入到含細胞的培養(yǎng)皿中。輕輕晃動培養(yǎng)皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復(fù)合物分散均勻。

（2）在37℃，5% CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復(fù)合物的培養(yǎng)液，更換新的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)至對轉(zhuǎn)入基因表達分析。

【注】：篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株，轉(zhuǎn)染細胞24 h后，將細胞傳代至新鮮的生長培養(yǎng)基中（將細胞稀釋10倍以上），在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h，加入篩選培養(yǎng)基。在有轉(zhuǎn)染抗性基因相匹配的藥物篩選條件下，約 1～2周可篩選到耐藥性克隆，在這期間需經(jīng)常更換含篩選藥物的生長培養(yǎng)基。

注意事項

1. 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。