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介紹細胞凍存的主要步驟
2022-09-13
細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復(fù)蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%．15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細胞內(nèi)水分透...
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原代細胞轉(zhuǎn)染的實驗操作要注意的事項
2022-09-06
原代細胞（primaryculturecell）是指從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞。有人把培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞培養(yǎng)。原代細胞不僅廣泛應(yīng)用于分子、細胞生物學(xué)和生物醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究，如蛋白質(zhì)組學(xué)、基因組學(xué)、細胞株（系）研究、DNA，RNA和遺傳學(xué)研究等，還可應(yīng)用于當(dāng)今熱門的生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)如藥物篩選、藥物代謝和毒理研究、癌癥藥物的研究等。細胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰毎麅?nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。轉(zhuǎn)...
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選擇真核細胞轉(zhuǎn)染試劑要考慮哪些因素
2022-08-30
轉(zhuǎn)染是采用除病毒感染外的其他方法將核酸(DNA或RNA)人工導(dǎo)入細胞的過程。采用各種化學(xué)、生物學(xué)或物理方法導(dǎo)入外源性核酸會改變細胞的特性,從而實現(xiàn)細胞基因功能和蛋白質(zhì)表達研究。轉(zhuǎn)染后,導(dǎo)入的核酸可以瞬時性地存在于細胞內(nèi),只表達一段時間且不會復(fù)制,也可以穩(wěn)定地整合至受體基因組內(nèi),隨著宿主基因組的復(fù)制而復(fù)制,各種基因輸送系統(tǒng)采用的術(shù)語與該領(lǐng)域的技術(shù)進展步調(diào)一致,并進一步區(qū)分不同的方法和細胞類型。轉(zhuǎn)染技術(shù)作為一種分析工具，可將外源基因?qū)胝婧思毎兄跈C體表征遺傳、蛋白質(zhì)合成、細...
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影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？
2022-08-19
細胞轉(zhuǎn)染是指將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細胞的技術(shù)。隨著分子生物學(xué)和細胞生物學(xué)研究的不斷發(fā)展，轉(zhuǎn)染已經(jīng)成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調(diào)控基因表達、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)等生物學(xué)試驗中，其應(yīng)用越來越廣泛。影響細胞轉(zhuǎn)染效率的因素有哪些？1.轉(zhuǎn)染試劑的選擇不同細胞系轉(zhuǎn)染效率通常不同，但細胞系的選擇通常是根據(jù)實驗的需要，因此在轉(zhuǎn)染實驗前應(yīng)根據(jù)實驗要求和細胞特性選擇適合的轉(zhuǎn)染試劑。每種轉(zhuǎn)染試劑都會提供一些已經(jīng)成功轉(zhuǎn)染的細胞株列表和文獻，通過這些資料可選...
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核酸純化的方法及原理
2022-08-19
核酸抽提與純化是分子生物學(xué)試驗的基礎(chǔ)，核酸純化方法是影響提取核酸質(zhì)量高低的最重要因素，也是下游分子生物學(xué)試驗成敗的關(guān)鍵。核酸純化的方法及原理如下：一、PC抽提法PC抽提是去除蛋白質(zhì)有效的手段，但超過了該飽和度，裂解體系中的蛋白質(zhì)不會被一次去除，必須靠多次抽提，方可*去除。且每次抽提都會損失部分核酸。另外，體系太粘稠的壞處是，蛋白質(zhì)難以*去除，以及基因組DNA會斷裂得更厲害，所以要注意裂解液與樣品的比例。PC抽提的另外一個用途是，利用酸性酚可以部分去除DNA的特點，在RNA抽提...
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化學(xué)發(fā)光免疫分析包含免疫分析系統(tǒng)和化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)
2022-07-22
在常溫下由化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光，產(chǎn)生電子能級處于激發(fā)態(tài)的物質(zhì)，后者通過躍遷釋放能量產(chǎn)生光子，從而導(dǎo)至的發(fā)光現(xiàn)象?；瘜W(xué)發(fā)光是一個多步驟的過程。學(xué)發(fā)光免疫分析(ChemiluminescenceImmunoassay，CLIA)誕生于1977年，是近十年來在世界范圍內(nèi)發(fā)展非常迅速的非放射性免疫分析，將高靈敏的化學(xué)發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合起來建立的微量測定技術(shù)，因此該技術(shù)靈敏度高、線性范圍寬、應(yīng)用范圍廣。而且CLIA與放射免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(IFA)及酶免疫分析(...
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PCR原理及反應(yīng)步驟
2022-07-21
PCR的原理：多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerasechainreaction)簡稱PCR技術(shù)，是近30多年發(fā)展起來的一種體外擴增特異性DNA片段的技術(shù)，可在數(shù)小時之內(nèi)對僅有幾個拷貝的基因放大千萬倍。那么，PCR的原理是怎樣的呢？PCR技術(shù)實際上是在模板DNA、引物以及原料(四種脫氧核糖核苷酸)在適宜的反應(yīng)條件下，通過DNA聚合酶的酶促反應(yīng)完成DNA擴增的過程。PCR技術(shù)的特異性取決于引物和模板DNA結(jié)合的特異性。PCR反應(yīng)分為三步：1)變性：通過加熱時DNA雙螺旋的氫鍵斷裂，...
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影響重組腸激酶活性的因素有哪些
2022-07-20
腸激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一種異源二聚體形式存在于哺乳動物十二指腸內(nèi)的絲氨酸蛋白酶。它能高效專一性的水解工程菌表達的融合蛋白（識別位點是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）釋放出目的蛋白，被廣泛用于生物工程制藥的開發(fā)。牛腸激酶由一條結(jié)構(gòu)亞基（重鏈）和一條催化亞基（輕鏈）構(gòu)成，二者以二硫鍵結(jié)合。據(jù)報道，重組腸激酶輕鏈體外具有全酶的酶切特異性，同時對基因工程融合蛋白底物的酶切活性較提純的牛腸激酶明顯增強。天然腸激酶來源有限，且從動物組織提...
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