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  • 外泌體是細胞間通訊的重要媒介

    2024-09-09 外泌體,這個在細胞生物學(xué)領(lǐng)域中逐漸嶄露頭角的神秘角色,正影響著我們對細胞通訊和疾病機制的理解。外泌體是由活細胞分泌的直徑約為30-150nm的小囊泡,具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu)。它們就像一個個精心包裝的小包裹,里面攜帶著多種重要的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、脂類、DNA和RNA等。這些物質(zhì)不僅在細胞與細胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起著關(guān)鍵作用,更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。外泌體存在于細胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中1。它們能夠很好地保護其包被的物質(zhì),并且能...
  • sirna轉(zhuǎn)染實驗步驟與轉(zhuǎn)染試劑推薦

    2024-09-06 sirna轉(zhuǎn)染實驗步驟(以24孔板為例)1.接種細胞對于貼壁細胞:轉(zhuǎn)染前一天,將細胞按照每孔1-2x10^5個細胞的量進行鋪板,使其在轉(zhuǎn)染時密度為60%-80%為佳。對于懸浮細胞:轉(zhuǎn)染當(dāng)天,配制轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物之前,用PBS清洗細胞1-2次,用250μLOpti-MEMI減血清培養(yǎng)基(無血清)重懸細胞,在24孔板中進行細胞鋪板,細胞密度為60-80%。2.準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染試劑-siRNA復(fù)合物(或轉(zhuǎn)染試劑-miRNA復(fù)合物)(1)對于每孔細胞,取2μLsiRNA(20μM,DEP...
  • 從實驗室到臨床:無血清細胞存凍液的轉(zhuǎn)化應(yīng)用之路

    2024-08-26 在生物醫(yī)學(xué)研究和細胞治療領(lǐng)域,細胞的長期保存與復(fù)蘇是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的細胞冷凍保存技術(shù)多依賴于含血清的培養(yǎng)基,但血清來源的不確定性及可能引入的污染,限制了其在某些領(lǐng)域的應(yīng)用。無血清細胞存凍液作為一種新興的細胞保存解決方案,為細胞冷凍保存技術(shù)開辟了新的篇章。本文將深入探討無血清細胞存凍液的原理、優(yōu)勢及其在細胞保存領(lǐng)域的重要性。無血清細胞存凍液是一種專為細胞冷凍保存設(shè)計的無血清、無蛋白的保存液。它通常含有細胞保護劑,如二甲基亞砜(DMSO)、乙二醇等,這些成分能夠減少細胞在冷...
  • 李記生物預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)(蛋白Marker的分類與選擇)

    2024-08-23 蛋白Marker即蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn),是幾種已知分子量的蛋白質(zhì)的混合物,像“尺子”一樣用來指示蛋白質(zhì)條帶的大小。在WesternBlot實驗中,蛋白Marker主要是用來指示蛋白條帶所對應(yīng)的分子量大小,此外,蛋白Marker還可以用來輔助判斷蛋白轉(zhuǎn)膜是否成功或蛋白在凝膠上的電泳進度等作用,所以選擇合適的蛋白Marker也是實驗成功的重要條件之一。李記生物預(yù)染蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)預(yù)染蛋白在不同的緩沖體系下有不同的表觀分子量,以上2個圖片為兩種緩沖體系下的電泳示意圖。適合作為SDS-PAG...
  • 無血清細胞凍存液的操作方法

    2024-08-21 無血清細胞凍存液的操作方法主要包括細胞的收集、離心、凍存液的加入、分裝、凍存以及后續(xù)的解凍與復(fù)蘇等步驟。以下是詳細的操作方法:一、細胞的收集與離心細胞收集:使用常規(guī)方法收集處于對數(shù)生長期的懸浮細胞或貼壁細胞。對于貼壁細胞,可以使用胰酶或EDTA等試劑進行消化,使其從培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板表面脫落,然后收集到試管或離心管中。細胞離心:將收集到的細胞懸浮液置于離心管中,進行離心處理以收集細胞沉淀。離心條件通常為1,0002,000rpm,4℃,持續(xù)35分鐘。注意,離心時應(yīng)確保溫度適宜,以...
  • 蛋白酶K的酶學(xué)特性及其在生物醫(yī)學(xué)研究中的重要性

    2024-08-17 蛋白酶K,屬于一種廣譜蛋白酶,由白色念珠菌(Candidaantarctica)發(fā)酵產(chǎn)生。它能夠在較寬的pH值范圍內(nèi)(pH4-12)保持活性,且在高溫條件下(65℃)仍能穩(wěn)定工作,這種穩(wěn)定性使蛋白酶K能夠在多種實驗條件下發(fā)揮其作用,成為科研人員手中的得力助手。在分子生物學(xué)領(lǐng)域,蛋白酶K的應(yīng)用尤為廣泛。在DNA提取過程中,蛋白酶K能夠高效地降解細胞和組織中的蛋白質(zhì),包括那些與DNA緊密結(jié)合的組蛋白,從而釋放出純凈的DNA,為后續(xù)的PCR擴增、測序等實驗提供高質(zhì)量的DNA模板。此...
  • RIPA裂解液介紹與如何選擇

    2024-08-15 提到蛋白提取,大家不約而同會想到RIPA裂解液,裂解液加入樣品中,離心即可完成蛋白的提取。然而RIPA裂解液我們真的用對了嗎?RIPA裂解液是從動物細胞或組織中提取蛋白的常用裂解液,其工作原理是利用去污劑(表面活性劑)裂解細胞膜和核膜,從而獲取細胞和組織中的RIPA可溶性蛋白。RIPA裂解液的選擇RIPA裂解液中主要包含去污劑,緩沖體系,等滲體系,變性劑、穩(wěn)定劑等。其中去污劑是細胞裂解液中重要成分,是由疏水尾端基團和極性親水頭端基團組成的兩性分子,它們能夠降低水的表面張力,所...
  • bca法測蛋白濃度原理、實驗步驟及注意事項

    2024-08-15 蛋白質(zhì)濃度測定是用于計算純化方法的回收率的重要方法。常用的測定方法包括雙縮脲法、Lowry法、紫外吸收法、BCA蛋白濃度檢測法等。其中常用的方法就是BCA法。BCA全稱是BicinchoninicAcidAssay,也叫SmithAssay,這個方法是由PaulK.Smith發(fā)明的。這個方法通過展示不同濃度樣品的顏色變化來判斷蛋白的濃度。檢測原理BCA是一種堿性的水溶性復(fù)合物,性質(zhì)穩(wěn)定。在其提供的堿性環(huán)境下,蛋白質(zhì)可以將BCA試劑中的Cu2+還原為Cu+,Cu+繼而與BCA試...
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