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當前位置:首頁 > 產(chǎn)品中心 > PCR&q-PCR > RT-PCR > AN33L718單鏈cDNA合成試劑盒(逆轉錄)

單鏈cDNA合成試劑盒(逆轉錄)

簡要描述:單鏈cDNA合成試劑盒(逆轉錄),包含熱穩(wěn)定的 M-MLV GIII 逆轉錄酶及其反應緩沖液、RNA 酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和隨機引物等所有逆轉錄反應所需組分,僅需添加 RNA 模板和水即可啟動反應,生成的 cDNA 主要用于后續(xù)的 qPCR 分析。

  • 產(chǎn)品型號:AN33L718
  • 廠商性質:生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-09-13
  • 訪  問  量:398

詳細介紹

品牌Life-iLab/李記生物貨號AN33L718
規(guī)格20T、100T供貨周期現(xiàn)貨
應用領域生物產(chǎn)業(yè)

產(chǎn)品描述

All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷且高質量的單鏈 cDNA 合成試劑盒,包含熱穩(wěn)定的 M-MLV GIII 逆轉錄酶及其反應緩沖液、RNA 酶抑制劑、dNTPs、Oligo(dT)20VN 和隨機引物等所有逆轉錄反應所需組分,僅需添加 RNA 模板和水即可啟動反應,生成的 cDNA 主要用于后續(xù)的 qPCR 分析。

提取的RNA 樣本常存在基因組DNA(gDNA)污染,可能導致gDNA 與 cDNA 在 qPCR 中同時擴增,影響定量準確性。本試劑盒通過 dsDNase 高效去除gDNA,特異性降解雙鏈 DNA或DNA-RNA 雜合鏈中的 DNA 鏈,并在逆轉錄溫度下快速不可逆失活。與傳統(tǒng)使用的 DNase I對比,無需額外 EDTA 處理,簡化實驗流程,降低逆轉錄反應的抑制風險。

本試劑盒可在同一管中進行逆轉錄和gDNA去除兩個反應,操作簡便,可有效降低復雜加樣過程造成的樣品污染和 RNA 降解的風險。但若基因組污染嚴重程度,建議選擇采用去除gDNA 污染與逆轉錄分開進行的操作方法。

訂購信息

產(chǎn)品名稱

貨號

規(guī)格

All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)

AN33L718

20T

All-in-One RT MasterMix (with dsDNase)

AN33L719

100T

產(chǎn)品組分

組分

AN33L718(20T)

AN33L719(100T)

A.  All-in-One   RT MasterMix

80 μL

400 μL

B.  dsDNase

20 μL

2*50 μL

C.  10×   dsDNase Bu?er

40 μL

200 μL

D.  Nuclease-Free   Water

400 μL

2*1 mL

運輸與保存

藍冰運輸。-20℃保存,有效期24個月。

使用方法

1. 針對基因組 DNA 含量低的 RNA 樣品(推薦方案)

① 于冰上配制如下反應體系:

試劑

使用量

模板 RNAa

50   ng~1 μg

All-in-One   RT MasterMix

4 μl

dsDNase

1 μl

Nuclease-Free   Water

To 20   μl

a . 推薦使用試劑盒提取的高質量 RNA 作為模板。

② 37℃溫育 2 min,以去除gDNA 污染;

③ 55℃溫育 15 min;

④ 反應結束后,85℃溫育 5 min 以終止反應;

⑤ 迅速將獲得的 cDNA 置于冰上,用于后續(xù)實驗;或立即保存于 -20℃。

2. 針對基因組 DNA 含量高的 RNA 樣品

(1)  基因組 DNA 污染去除

① 于冰上配制如下反應體系:

試劑

使用量

模板 RNAa

50   ng~1 μg

dsDNase

1 μl

10×   dsDNase Bu?er

1 μl

Nuclease-Free   Water

To 10   μl

a.    推薦采用試劑盒提取的 RNA 作為模板。

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 37℃溫育 2 min,以去除基因組 DNA 污染;

注:若 RNA 中基因組 DNA 污染嚴重,可適當延長 37℃溫育時間至 5 min。

④ 65℃溫育 2 min,使 dsDNase 失活, 冰上放置。

(2)  第一鏈 cDNA 合成

① 于冰上配制如下反應體系:

試劑

使用量(實驗組)

“實驗 (1)"反應產(chǎn)物

10 μl

All-in-One   RT MasterMix

4 μl

Nuclease-Free   Water

To 20   μl

② 輕柔吸打混勻,瞬離;

③ 50℃溫育 15 min;

注:若目標 RNA 不含 Poly(A) 結構,可預先 25℃溫育 10 min。

④  反應結束后, 85℃溫育 5 min,以終止反應;

⑤ 將獲得的 cDNA 溶液置于冰上,用于后續(xù)實驗。

注:cDNA 溶液置于 -20℃儲存,建議不超過 1 周;置于 -80℃可長期儲存。

注意事項

1. 預混液中已包含 Oligo(dT)20VN 和隨機引物,適用于含有 Poly(A) 結構的真核生物 mRNA,以及不含 Poly(A) 結構的原核生物 RNA、真核生物 rRNA 和 tRNA 等模板,但不適用于 miRNA 等小RNA模板。

2. 由于隨機引物會在RNA的任意位置啟動逆轉錄,因此不建議使用本產(chǎn)品進行真核生物全長cDNA的克隆。

3. 本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。

本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領域。


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